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赤霉素(GA)包含多种植物内部和真菌天然产生的化学物质。它们是在包括黑泽荣一在内的日本研究人员注意到由一种名为“赤霉赤霉菌”的真菌产生的化学物质在水稻植物中异常生长时发现的。后来发现,GA也是由植物本身产生的,并在整个生命周期中控制着多个方面的发育。种子发芽时,GA的合成在种子中强烈上调,发芽需要其存在。在幼苗和成虫中,GA强烈促进细胞伸长。遗传算法还促进营养生长和生殖生长之间的过渡,并且受精过程中花粉功能也是必需的。

茁彩通过提取样品中植物内源激素,再以安捷伦高效液相色谱仪串联AB公司Qtrap质谱仪,测定植物内源激素。

1.试剂

以下所有试剂如无特别注明,均为分析纯。实验用水为蒸馏水,去离子水或相当纯度的水。

赤霉素(GA)标准品、CNWC18QuEChers填料、色谱级甲醇、乙腈、乙腈(样品提取液)。

2.仪器设备

(1)TG-16G台式高速离心机、电子天平、Agilent高效液相色谱仪、SCIEX-Qtrap(MSMS)、气浴恒温摇床、超声清洗仪、水浴氮吹仪。

.标曲溶液配置

(1)取甲醇溶液μl加入1.5ml离心管,加入μg/ml每种激素标准品储备液各2μl,震荡均匀,配置为终浓度1μg/ml的使用母液以备后续使用。

(2)取甲醇溶液.9μl、.8μl、.5μl、μl、μl、μl、μl分别加入1.5ml离心管,而后取步骤(1)中配置的母液分别0.1μl、0.2μl、0.5μl、1μl、2μl、5μl、20μl顺序加入上述甲醇溶液中,配置为终浓度0.1ng/ml、0.2ng/ml、0.5ng/ml、1ng/ml、2ng/ml、5ng/ml、20ng/ml的标曲溶液。

4.流动相配置

(1)有机相:取色谱纯甲醇ml加入1L容量瓶,加入1ml甲酸,以甲醇定容至1L,颠倒混匀。

(2)无机相:取超纯水ml加入1L容量瓶,加入1ml甲酸,以超纯定容至1L,颠倒混匀。

5.植物激素提取

(1)准确称取样品约0.-0.8g,加入10倍体积乙腈溶液;

(2)4℃提取过夜,g离心5min,取上清液;

()沉淀再次加入5倍体积乙腈溶液,提取两次,合并所得上清液;

(4)加入15-40mgC18填料,剧烈震荡0s,g离心5min,取上清液;

(5)氮气吹干,以μl甲醇复溶,过0.22μm有机相滤膜,放入-20℃冰箱待上机检测。

(6)进样体积:2μl。

6实验结果与分析

(1)植物样品中激素含量(ng/g)=检测浓度(ng/ml)×稀释体积(ml)/称取质量(g)

其中稀释体积为样品最终溶解进样时所用的溶液体积,称取质量为提取时的取样质量。

(2)检测浓度由待测物质峰面积代入标曲方程,由仪器自动求得。

表:GA检测结果

GA标准曲线



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