方法2:从带电荷或者中性的尼龙膜上洗脱杂交后的探针。大部分尼龙膜的制造商都会提供从其特定类型膜上洗脱各种不同探针的最佳方案。建议按这些方法操作。另外,也可以用下表中所述的三种探针洗脱缓冲液中的一种,处理杂交后的膜。
1.按照配方配制上表中所列的某一种探针洗脱液数百毫升,将膜浸于溶液中,按照文中所述方法洗脱探针并洗膜。
2.将膜放在一叠纸巾上以去除大部分液体,将湿润的膜夹在两张Saran包装膜之间,用X射线片曝光以检查是否所有的探针都被洗脱。
3.干燥膜,将其松散地包在铝箔纸或者一叠吸水纸中间,室温下(最好是真空条件下)保存直到需要时。对膜进行重复杂交时,将其置于预杂交液中,然后按照方案13步骤2进行后续实验。甲酰胺在液体缓冲体系中用作离子溶剂。
许多批号的高等级甲酰胺,其纯度可以满足直接使用而不用进一一步处理。但是作为一条首要原则,一旦出现黄色或者有氨的味道产生,则甲酰胺需要纯化。更为精确的检测纯度实验是测电导率,当甲酰胺降解为甲酸铵时,电导率会升高。
纯甲酰胺的电导率为1.7(CaseyandDavidson),而10~3mol/L甲酸铵溶液的电导率为umho.用于重新复性实验的甲酰胺的电导率应2.0umho,甲酰胺可以通过与离子交换树脂(如DowexAG8,20~50mesh,或G-X8[D])混合后,放在磁力搅拌器上搅拌1h达到去离子效果。
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