亮氨酸氨基肽酶LAP特性及测定方法

亮氨酸氨基肽酶（LeucineAminopeptidase,LAP）是一种蛋白酶，肝内含量很丰富。肝内外胆淤时，LAP活力显著增高，尤其在恶性胆淤时，其活力随病情进展而持续增高。试剂对肝道梗阻及胰腺癌的诊断有价值。肝坏疽、肝肿瘤、肝炎、乳腺癌、肝癌、胆道癌、胰腺癌、子宫内膜癌、卵巢癌明显增高。肝硬化、传染性肝炎可中度增高，常为参考值的2-4倍。阻塞性黄疸明显增高，常达参考值5倍以上，并出现在胆红素或ALP上升之前。

一、概况

1.反应式

最适pH值为9.1(Mn2+离子激活作用)。

2.米氏常数

①Mg2+激活。②Mn2+激活。

3.专一性

此酶能作用许多蛋白质与多肽的N-端氨基酸而释放出各种氨基酸。此酶被称为亮氨酸氨肽酶,是因为它与L-亮氨酸起反应最快速。此酶也能水解某些脂肪族胺类。作用于四种L-亮氨酸的相对水解速度，列举在上表中。

4.激活剂与抑制剂

Mn2+与Mg2+皆是激活剂，而Mn+最佳。强抑制剂有：Ca2+Cu2+，Pb2+，Hg2+，Fe3+，柠檬酸，对-氯汞基苯甲酸以及EDTA弱抑制剂是Ni2+，Zn2+，Fe2+，CN-，SH-以及P2O72-等离子。

5.意义

妊娠期间，血清中亮氨酸氨肽酶活性水平升高，当妊娠7~9月，此酶活性水平较正常情况上升2~4倍。在肝、胰腺以及胆道等器官患病状况下，例如，急性胰腺炎,病毒性肝炎以及胰腺痛等病例中，也发现此酶水平升高。

血清中此酶正常值是：男性84~GR(Goldberg-Rutenburg)单位，而女性76~GR单位。

6.稳定性

将此酶悬浮在pH8~8.5的硫酸铵溶液中(含有Mg2+离子)，于4℃下能稳定数月之久。

二、测定方法

可使用L-亮氨酰胺作底物，LAP分解L-亮氨酰对硝基苯胺生成对硝基苯胺，后者在nm有最大吸收峰，通过测定吸光值升高速率来计算LAP活性。

可用于测定亮氨酸氨酞酶的底物不胜枚举，其中一种是L-亮氨酰-B-萘酰胺，它可被此酶分解为β-萘胺：

然后，使β-萘胺重氮化，进而与N-(1-萘酰)乙二胺盐酸盐进行偶合反应，生成一种偶氮染料:

于是，可测量此染料的吸光率。胰蛋白酶、胰凝乳蛋白酶、胃蛋白酶或羧肽酶却不能水解此底物。

同样地，L-亮氨酸-对-硝基酰替苯胺亦可用作此酶的底物，生成的对-硝基苯胺可于nm处连续测量其吸光率变化或者进行重氮化与偶合反应而生成偶氮染料，而后于nm处测量其吸光率。