Worthington真菌分泌酶研究丨半

半乳糖氧化酶(GAO)是一种真菌分泌酶，可催化一系列伯醇氧化为相应的醛，同时将分子氧还原为过氧化氢。

艾美捷Worthington半乳糖氧化酶特异性：

GAO具有广泛的底物特异性，但具有显着的立体特异性，仅氧化底物的D-异构体(McPhersonetal.)。GAO将氧化游离和聚合形式的半乳糖和一些半乳糖衍生物。氧化发生在C6位置。

艾美捷Worthington半乳糖氧化酶化学性质：

分子量：68.5kDa（根据翻译的DNA序列和SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳计算，McPhersonetal.）

68.0±3.0kDa（由物理测量确定，Cooper等人）

最佳pH值：7.0（库珀等人，年）

等电点：7.75（理论）

消光系数：

,cm-1M-1（理论值）

E1%,=17.87(理论)

抑制剂：

氰化物

二乙基二硫代氨基甲酸酯

叠丨氮化物

羟胺

乙二胺四乙酸

应用

血液和其他生物体液中半乳糖的定量测定（Frings和Pardue、Hankin和Roth等人）

组织化学定位半乳糖(RobertsandGupta)

检测和区分糖蛋白(Itayaetal.)

艾美捷Worthington半乳糖氧化酶测定：

Method:在过氧化物酶/邻联甲苯胺偶联系统中测量反应速度，作为由半乳糖氧化引起的A的增加。在25°C和规定条件下的pH值6.0下，一个单位导致A的变化为每分钟1.0。

试剂：

0.1M磷酸钾缓冲液，pH6.0

0.5%邻甲苯胺。注意：据报道邻甲苯胺具有致癌性。小心轻放。

过氧化物酶。将Worthington过氧化物酶（代码：HPOD）以大约60u/ml的浓度溶解在试剂级水中。

10%半乳糖。静置过夜以达到突变平衡。

酶：

以1mg/ml的浓度溶解在试剂级水中。进一步稀释至浓度为0.2-0.5单位/ml。

程序：

将分光光度计调整到nm和25°C。

通过将0.1mltolidine添加到12ml0.1M磷酸钾缓冲液pH6.0中来制备tolidine-缓冲混合物。

将移液器移入每个比色皿，如下所示：

联苯胺缓冲液1.7毫升

10%半乳糖1.5毫升

过氧化物酶0.1毫升

在分光光度计中于25°C孵育3-4分钟以达到温度平衡并确定空白率（如果有）。加入0.1ml适当稀释的酶并记录A/min的增加。从曲线的初始线性部分。