一、范围
本标准规定了动物性食品中5种α2-受体激动剂的制样和高效液相色谱仪-串联质谱测定方法。本标准适用于猪肌肉、肝脏和肾脏组织及鸡肌肉和肝脏组织中替扎尼定、赛拉嗪、溴莫尼定、安普乐定和可乐定残留量的测定。
二、原理
试样中残留的α2-受体激动剂，用碳酸钠缓冲溶液、乙酸乙酯提取，固相萃取柱净化，高效液相色谱仪-串联质谱测定，外标法定量。
三、试剂和材料
除另有规定外，所有试剂均为分析纯，水为符合GB/T规定的一级水。
3.1试剂
3.1.1乙腈（CH3CN）：色谱纯。
3.1.2甲酸（HCOOH）：色谱纯。
3.1.3甲醇（CH3OH）。
3.1.4氨水（NH4OH）。
3.1.5无水碳酸钠（Na2CO3）。
3.1.6碳酸氢钠（NaHCO3）。
3.1.7乙酸乙酯（CH3COOC2H5）。
3.2溶液配制
3.2.1碳酸钠溶液：取无水碳酸钠10.6g，用水溶解并稀释至mL。
3.2.2碳酸氢钠溶液：取碳酸氢钠8.4g，用水溶解并稀释至mL。
3.2.3碳酸钠缓冲溶液：取碳酸钠溶液90mL、碳酸氢钠溶液10mL，混匀，现用现配。
3.2.4甲酸溶液（0.2％）：取甲酸1mL，用水溶解并稀释至mL。
3.2.5甲酸-乙腈溶液：取0.2%甲酸溶液80mL，加乙腈20mL，混匀。
3.2.6氨水甲醇溶液（5％）：取氨水5mL，用甲醇溶解并稀释至mL。
3.3标准品：盐酸替扎尼定、盐酸赛拉嗪、溴莫尼定、盐酸安普乐定和盐酸可乐定：含量均≥98%。
3.4标准溶液制备
3.4.1标准贮备液：取盐酸替扎尼定、盐酸赛拉嗪、溴莫尼定、盐酸安普乐定和盐酸可乐定标准品各约10mg，精密称定，分别于10mL量瓶中，用甲醇溶解并稀释至刻度，配制成浓度均为1mg/mL的盐酸替扎尼定、盐酸赛拉嗪、溴莫尼定、盐酸安普乐定和盐酸可乐定标准贮备液。2～8℃保存，有效期6个月。
3.4.2混合标准工作液：分别精密量取上述标准贮备液各1mL，于mL量瓶中，用甲醇溶解并稀释至刻度，配制成浓度为10μg/mL的混合标准工作液。于2～8℃保存，有效期1个月。
3.4.3标准曲线制备：分别精密量取混合标准工作液适量，用甲酸-乙腈溶液稀释配制成浓度为0.5、1、10、50和μg/L系列混合标准工作液，临用现配。
3.5材料
3.5.1固相萃取MCX柱：60mg/3mL，或相当者。
3.5.2滤膜：有机相，0.22μm。
四、仪器和设备
4.1高效液相色谱仪-串联质谱仪：配电喷雾电离源。
4.2分析天平：感量0.g和0.01g。
4.3均质机。
4.4离心机。
4.5涡旋振荡器。
4.6旋转蒸发仪。
4.7固相萃取装置。
4.8鸡心瓶。
4.9离心管：50mL。
五、测定步骤
5.1提取
取试料2g（准确至±20mg），于50mL离心管中，加碳酸钠缓冲液5mL，振荡混匀，加乙酸乙酯10mL，充分振荡，于r/min离心5min，取上清液于鸡心瓶中，下层溶液中加乙酸乙酯10mL重复提取一次，合并两次上清液。于55℃旋转蒸发至干，加甲酸-乙腈溶液4.0mL溶解残余物，备用。
5.2净化
MCX柱依次用甲醇、水各3mL活化。取备用液过柱，用水3mL、甲醇3mL分别淋洗，挤干，氨水甲醇溶液6mL洗脱，收集洗脱液，于60℃旋转蒸发至干，用甲酸-乙腈溶液1.0mL溶解残余物，滤过，高效液相色谱仪-串联质谱测定。
5.3测定
5.3.1色谱条件
a）色谱柱：C18（mm×3.0mm，粒径1.8μm），或相当者；
b）柱温：30℃；
c）进样量：10L；
d）流速：0.3mL/min；
e）流动相：A：乙腈；B：0.2％甲酸溶液，梯度洗脱程序见表1。
5.3.2质谱条件
a）离子源：电喷雾离子源；
b）扫描方式：正离子扫描；
c）检测方式：多反应监测；
d）离子源温度：℃；
e）脱溶剂温度：℃；
f）毛细管电压：3.0V；
g）定性离子对、定量离子对及锥孔电压和碰撞能量见表2。
5.4测定法
5.4.1定性测定
在同样测试条件下，试样液中α2-受体激动剂的保留时间与标准工作液中相应α2-受体激动剂的保留时间之比，偏差在±5%以内，且检测到离子的相对丰度，应当与浓度相当的校正标准溶液相对丰度一致，其允许偏差应符合表3要求。
5.4.2定量测定
取试样溶液和相应的标准工作液，按外标法以峰面积定量，标准工作液及试样溶液中的α2受体激动剂类响应值均应在仪器检测的线性范围内。在上述条件下，α2受体激动剂标准溶液特征离子质量色谱图见附录A。
六、结果计算和表述
试料中待测药物的残留量按式（1）计算：
…………………………………………………（1）
式中：
X——供试试料中相应的α2受体激动剂类药物残留量，单位为微克每千克（μg/kg）；
Cs——标准溶液中相应的α2受体激动剂类药物浓度，单位为微克每升（g/L）；
A——试样溶液中相应的α2受体激动剂类药物的色谱峰面积；
As——标准溶液中相应的α2受体激动剂类药物色谱峰面积；
V——溶解残余物所用的溶液体积，单位为毫升（mL）；
m——供试试料质量，单位为克（g）；
计算结果需扣除空白值，测定结果用平行测定的算术平均值表示，保留两位有效数字
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